兔（Rabbit）出血癥病毒（RHDV）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗?產品貨號：DM-R14151產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合?+?酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1.?雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。?2.?間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3.?競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1.?預包被酶標板（96 孔）2.?標準品（梯度濃度）3.?酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4.?樣本稀釋液5.?洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6.?顯色底物液（A、B 液或單液）7.?終止液8.?封板膜 / 封板膠?（二）樣本相關1.?待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2.?樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等?（三）儀器設備1.?酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2.?洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3.?移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4.?移液器吸頭（帶濾芯更佳）5.?渦旋振蕩器6.?離心機（樣本處理用）7.?恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8.?冰箱（2–8℃、-20℃）?（四）耗材與輔助用品1.?EP 管、凍存管2.?一次性手套、口罩3.?吸水紙 / 濾紙4.?計時器5.?去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6.?廢液缸、吸水紙?（五）可選 / 特殊實驗材料1.?封板膜 / 封板膠2.?振蕩器（微孔板搖床）3.?多道移液器（8/12 道）4.?加樣槽5.?微孔板封口膜、鋁箔（避光）?四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存?五、結果計算（通用流程）1.?數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2.?有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。?六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。?
兔硫酸乙酰肝素（HS）ELISA檢測試劑盒產品貨號：DM-R14140產品規格：48/96TELISA 試劑盒，全稱酶聯免疫吸附試驗試劑盒（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Kit），是基于抗原 - 抗體的特異性免疫結合特性，搭配酶促信號放大體系，實現對生物樣本中目標物質＊＊定性、＊＊定量的商品化成套實驗試劑。它是生命科學、生物醫藥領域＊主流的蛋白類物質定量工具，也是你此前檢測細胞培養上清中目標因子、驗證樣本凍存合規性的核心實驗載體。ELISA 試劑盒為預制好的成套反應體系，無需自行優化配液，開箱即可使用，核心組分及對應作用如下：預包被 96 孔酶標板：整個反應的固相載體，孔內提前固定了針對目標物的特異性捕獲抗體，也就是你合并樣本后分裝上樣的 ELISA 板，核心作用是特異性抓取樣本中的目標物質。 標準品：已知＊＊濃度的目標物純品，用于梯度稀釋后構建標準曲線，是換算待測樣本中目標物＊＊濃度的唯一參照，你此前關注的「標曲 R2≥0.99」，就是針對該組分構建的曲線合格標準。 酶標檢測抗體：針對目標物另一結合表位的特異性抗體，提前偶聯了辣根過氧化物酶（HRP，＊常用）或堿性磷酸酶（AP），可與捕獲抗體、目標物形成穩定的 “夾心復合物”，通過偶聯酶的催化作用實現信號放大，讓微量目標物也能被檢測到。底物液：＊常用的是 TMB 底物，可與 HRP 發生酶促反應產生藍色顯色產物，顯色的深淺與樣本中目標物的濃度呈嚴格正相關，是定量檢測的信號來源。 終止液：多為稀硫酸溶液，可瞬間終止酶促顯色反應，讓藍色產物轉為穩定的黃色，終止后需在 10 分鐘內用酶標儀讀取特定波長下的吸光度值（OD 值），完成信號檢測。 濃縮洗滌液：多為含吐溫的 PBST 緩沖液，用于孵育后洗去孔內未結合的游離物質，降低非特異性結合帶來的背景干擾，是保證檢測結果準確性的核心組分，也是你此前關注的「洗板操作一致性」的核心物料。 樣本 / 標準品稀釋液：用于梯度稀釋標準品和待測樣本，可消除細胞培養基、血清等帶來的基質效應，保證所有樣本的反應體系完全一致，避免檢測結果失真。 封板膜：孵育時用于密封酶標板，避免孔內液體蒸發、外源污染，保證板內所有孔的孵育環境完全均一。 你檢測細胞培養上清中蛋白類目標物，使用的幾乎都是雙抗體夾心 ELISA 試劑盒，這也是目前＊主流的試劑盒類型，核心工作原理如下：捕獲階段：將標準品、待測樣本加入預包被了捕獲抗體的酶標板孔中孵育，樣本中的目標物會被捕獲抗體特異性抓取，固定在孔底； 洗滌去除雜質：洗去未結合的游離蛋白、培養基雜質等非特異性物質，僅保留結合在孔底的目標物； 檢測與信號放大：加入酶標檢測抗體，與目標物的另一表位結合，形成 “捕獲抗體 - 目標物 - 酶標檢測抗體” 的夾心復合物，再次洗滌去除未結合的多余抗體； 顯色與讀數：加入底物液，復合物上偶聯的酶會催化底物顯色，加入終止液終止反應后，用酶標儀讀取 OD 值；＊終通過標準品的濃度和對應 OD 值擬合標準曲線，即可換算出待測樣本中目標物的＊＊濃度。 根據檢測目標物和反應模式，ELISA 試劑盒主要分為兩類，你日常使用的以第一類為主：雙抗體夾心 ELISA 試劑盒：適用于檢測細胞因子、抗體、重組蛋白等大分子物質，也是細胞培養上清樣本檢測的金標準方案，特異性強、靈敏度高、可＊＊定量； 競爭法 ELISA 試劑盒：適用于檢測激素、小分子多肽等分子量過小、無法同時結合兩個抗體的物質，通過競爭結合的模式實現定量。 ELISA 試劑盒之所以成為你這類細胞實驗樣本檢測的＊＊工具，核心優勢在于：靈敏度極高，通過酶促信號放大可檢測到 pg/mL 級別的微量目標物，完全適配細胞培養上清中低豐度細胞因子的檢測；特異性極強，基于抗原 - 抗體的特異性結合，可＊＊識別目標物，幾乎不受樣本中其他蛋白的干擾；操作簡便、通量高，預制體系無需自行優化，可同時檢測數十個樣本，適配批量細胞孔樣本的檢測需求；可實現＊＊定量，通過標準品可＊＊換算出樣本中目標物的具體濃度，而非僅定性判斷陰陽，完全匹配你驗證樣本濃度是否符合凍存要求、合并后樣本均一性的實驗需求。ELISA（酶聯免疫吸附測定，Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的核心原理是：抗原與抗體的特異性免疫反應 + 酶催化底物的化學顯色反應，通過顏色深淺定量 / 定性判斷樣本中待測物濃度。一、核心邏輯（所有 ELISA 都遵循）1. 免疫識別：利用抗原（Ag）和抗體（Ab）之間高度特異性結合，只 “抓” 目標分子。2. 酶標記放大：將酶（常用 HRP、AP）標記在抗體 / 抗原上，作為信號放大系統。3. 底物顯色：酶催化無色底物生成有色產物，顏色深淺與酶量成正比，也與待測物濃度成正比。4. 比色定量：酶標儀測吸光度（OD 值），通過標準曲線計算待測物濃度。二、四大經典 ELISA 檢測原理（＊常用）1. 雙抗體夾心法（Sandwich ELISA）—— ＊常用，測大分子抗原 / 蛋白適用對象：大分子蛋白、細胞因子、激素、膜蛋白、分泌蛋白等（有多個抗原表位）。結構：捕獲抗體 → 待測抗原 → 檢測抗體（酶標 / 生物素化）。步驟邏輯：1. 固相載體（微孔板）預包被捕獲抗體（Capture Ab）。2. 加入樣本，樣本中的待測抗原（Ag）與捕獲抗體特異性結合。3. 加入酶標記檢測抗體（Detection Ab-HRP），與抗原另一表位結合，形成：捕獲 Ab - 抗原 Ag - 檢測 Ab-HRP 夾心復合物。4. 洗去未結合物質，加入底物 TMB，HRP 催化顯色。5. 加終止液，測 OD 值。顏色越深 → 抗原濃度越高。特點：特異性高、靈敏度高（pg/mL 級）。適合大分子、多表位抗原。不適合小分子（如激素、藥物小分子，表位太少夾不住）。 2. 直接法 ELISA（Direct ELISA）—— ＊簡單，測抗原適用對象：已知抗原定性 / 半定量，或包被抗原的驗證。結構：固相抗原 → 酶標一抗。步驟邏輯：1. 微孔板直接包被待測抗原（Ag）。2. 加入酶標記一抗（Primary Ab-HRP），直接與抗原結合。3. 洗板、加底物顯色、測 OD。4. 顏色越深 → 抗原量越多。特點：步驟＊少、速度快。但靈敏度低，一抗需酶標記，通用性差。科研中多用于包被效率驗證，少用于臨床 / 精確定量。 3. 間接法 ELISA（Indirect ELISA）—— 主要測抗體（如抗體滴度、自身抗體）適用對象：檢測樣本中的抗體（如 IgG、IgM、病毒抗體、自身抗體）。結構：固相抗原 → 一抗（樣本抗體） → 酶標二抗。步驟邏輯：1. 微孔板包被已知純化抗原（Ag）。2. 加入樣本，樣本中的 ** 待測抗體（Ab）** 與抗原結合。3. 加入酶標記二抗（Secondary Ab-HRP，抗人 / 抗鼠 IgG 等），識別一抗 Fc 段。4. 洗板、顯色、測 OD。顏色越深 → 樣本中抗體滴度越高。特點：靈敏度高，二抗可通用（同一酶標二抗可測多種一抗）。主要用于抗體檢測，不適合測抗原。 4. 競爭法 ELISA（Competitive ELISA）—— 測小分子抗原 / 半抗原適用對象：小分子激素、藥物、多肽、毒素、小分子代謝物（只有一個表位，無法夾心）。結構：固相抗體 / 抗原 + 酶標抗原 / 抗體與樣本待測物 “競爭結合”。有兩種常見形式，原理一致、方向相反：（1）抗體包被，酶標抗原競爭（＊常用）1. 微孔板包被捕獲抗體。2. 同時加入：樣本待測小分子抗原 + 酶標記抗原（Ag-HRP）。3. 兩者競爭結合有限的抗體位點：4. 樣本中抗原多 → 占據更多抗體 → 酶標抗原結合少 → 顯色淺。5. 樣本中抗原少 → 酶標抗原結合多 → 顯色深。6. 顯色后，OD 值與待測抗原濃度成反比。（2）抗原包被，酶標抗體競爭1. 微孔板包被已知抗原。2. 樣本待測抗原 + 酶標抗體混合加入，競爭結合抗原。3. 樣本抗原多 → 酶標抗體結合少 → 顯色淺。特點：必須用于小分子、單表位物質。標準曲線是下降型（濃度越高，OD 越低），計算時注意方向。特異性要求極高，否則易受結構類似物干擾。 三、信號系統原理（HRP + TMB ＊常見）絕大多數 ELISA 用這套：1.酶：辣根過氧化物酶（HRP）。2.底物：TMB（四甲基聯苯胺），無色。3.反應：HRP 催化 H?O?氧化 TMB → 生成藍色可溶性產物。4.終止：加硫酸（終止液），藍色變為黃色，穩定。5.讀數：450 nm 測 OD（參考波長 630 nm）。方法主要檢測對象信息與濃度關系適用分子大小典型應用雙抗體夾心法抗原（蛋白）正相關（濃度高→色深）大分子（多表位）小分子、半抗原直接法抗原正相關大分子抗原定性、包被驗證間接法抗體正相關抗體病毒抗體、自身抗體、免疫滴度競爭法抗原（小分子）負相關（濃度高→色淺）小分子、半抗原類固醇激素、藥物、多肽、毒素一句話總結雙抗體夾心法：捕獲抗體抓抗原，酶標抗體再夾心，色深 = 濃度高。間接法：抗原抓樣本抗體，酶標二抗放大，色深 = 抗體高。競爭法：樣本與酶標物搶結合位點，色淺 = 濃度高。 試劑盒的組成結果判斷一、顯色與 OD 值初判（肉眼 + 酶標儀）顯色觀察：標準品孔應呈梯度顯色（TMB 底物終止后由藍變黃）；空白 / 陰性對照基本無色。 OD 值質控（夾心法常用）：空白孔 OD ＜ 0.2 ＊高標準品 OD ＞ 1.0 樣本 OD 需落在標準曲線范圍內；超出上限→稀釋重測；低于下限→濃縮或換高敏試劑盒 二、標準曲線與對照驗證（實驗有效性）標準曲線：相關系數 R2 ≥ 0.99（越接近 1 越好） 推薦用 四參數邏輯（4PL）擬合 標準品 CV% ＜ 8% 對照孔：陰性對照（NC）：背景低，過高提示非特異結合 陽性對照（PC）：應有明顯信號，無信號則實驗失敗 樣本重復性：復孔 CV% ＜ 10%（可靠）；10%–15% 可接受；＞15% 需重測 三、結果判讀方法1. 定性判斷（陰 / 陽）計算 Cut-off 值（按試劑盒說明書，常見：NC 均值 + 2SD 或 NC×2.1） 樣本 OD ＞ Cut-off → 陽性 樣本 OD ＜ Cut-off → 陰性 接近 Cut-off → 復測確認 2. 定量判斷（濃度計算）用標準曲線將樣本 OD 值換算為目標物濃度 結果需在試劑盒檢測范圍內 3. 半定量判斷（效價 / 相對水平）以＊高稀釋倍數仍呈陽性為效價，用于抗體滴度等 四、常見異常與處理高背景 / 花板：優化封閉、洗滌，降低抗體濃度 無顯色 / 顯色過淺：檢查底物、抗體活性，延長孵育 曲線 R2 低 / 點偏離：排查移液、標準品稀釋、孵育條件 復孔 CV 大：規范加樣、洗板，減少邊緣效應
兔（Rabbit）絨毛膜促性腺激素β（β-HCG）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗產品貨號：DM-R14150產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合 + 酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1. 雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。2. 間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3. 競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1. 預包被酶標板（96 孔）2. 標準品（梯度濃度）3. 酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4. 樣本稀釋液5. 洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6. 顯色底物液（A、B 液或單液）7. 終止液8. 封板膜 / 封板膠 （二）樣本相關1. 待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2. 樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等 （三）儀器設備1. 酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2. 洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸頭（帶濾芯更佳）5. 渦旋振蕩器6. 離心機（樣本處理用）7. 恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材與輔助用品1. EP 管、凍存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水紙 / 濾紙4. 計時器5. 去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6. 廢液缸、吸水紙 （五）可選 / 特殊實驗材料1. 封板膜 / 封板膠2. 振蕩器（微孔板搖床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加樣槽5. 微孔板封口膜、鋁箔（避光）四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存五、結果計算（通用流程）1. 數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2. 有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。 六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
兔（Rabbit）孕酮（PROG）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗產品貨號：DM-R14149產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合 + 酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1. 雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。2. 間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3. 競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1. 預包被酶標板（96 孔）2. 標準品（梯度濃度）3. 酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4. 樣本稀釋液5. 洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6. 顯色底物液（A、B 液或單液）7. 終止液8. 封板膜 / 封板膠 （二）樣本相關1. 待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2. 樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等 （三）儀器設備1. 酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2. 洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸頭（帶濾芯更佳）5. 渦旋振蕩器6. 離心機（樣本處理用）7. 恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材與輔助用品1. EP 管、凍存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水紙 / 濾紙4. 計時器5. 去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6. 廢液缸、吸水紙 （五）可選 / 特殊實驗材料1. 封板膜 / 封板膠2. 振蕩器（微孔板搖床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加樣槽5. 微孔板封口膜、鋁箔（避光）四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存五、結果計算（通用流程）1. 數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2. 有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。 六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
兔（Rabbit）雌二醇（E2）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗產品貨號：DM-R14148產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合 + 酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1. 雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。2. 間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3. 競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1. 預包被酶標板（96 孔）2. 標準品（梯度濃度）3. 酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4. 樣本稀釋液5. 洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6. 顯色底物液（A、B 液或單液）7. 終止液8. 封板膜 / 封板膠 （二）樣本相關1. 待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2. 樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等 （三）儀器設備1. 酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2. 洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸頭（帶濾芯更佳）5. 渦旋振蕩器6. 離心機（樣本處理用）7. 恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材與輔助用品1. EP 管、凍存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水紙 / 濾紙4. 計時器5. 去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6. 廢液缸、吸水紙 （五）可選 / 特殊實驗材料1. 封板膜 / 封板膠2. 振蕩器（微孔板搖床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加樣槽5. 微孔板封口膜、鋁箔（避光）四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存五、結果計算（通用流程）1. 數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2. 有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。 六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
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