魚(Fish)谷胱甘肽(GSH)ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗產品貨號:DM-QT46656產品規格:48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA(酶聯免疫吸附測定)核心是抗原 - 抗體特異性結合 + 酶促顯色反應,通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理:1. 雙抗體夾心法(測大分子抗原 / 蛋白)固相包被捕獲抗體 → 加入樣本(待測抗原)→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。2. 間接法(測抗體)固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3. 競爭法(測小分子抗原 / 半抗原)待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多,顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料(一)試劑盒本身(核心)1. 預包被酶標板(96 孔)2. 標準品(梯度濃度)3. 酶結合物(酶標抗體 / 酶標抗原)4. 樣本稀釋液5. 洗滌液(濃縮液,使用前稀釋)6. 顯色底物液(A、B 液或單液)7. 終止液8. 封板膜 / 封板膠 (二)樣本相關1. 待測樣本(血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等)2. 樣本處理試劑(視樣本類型):抗凝劑(EDTA、肝素、檸檬酸鈉等)蛋白酶抑制劑(如組織樣本)裂解液、勻漿緩沖液等 (三)儀器設備1. 酶標儀(450 nm 為主,部分需雙波長)2. 洗板機(推薦)或洗板瓶 / 排槍3. 移液器(0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL)4. 移液器吸頭(帶濾芯更佳)5. 渦旋振蕩器6. 離心機(樣本處理用)7. 恒溫培養箱 / 水浴(37℃ 孵育用)8. 冰箱(2–8℃、-20℃) (四)耗材與輔助用品1. EP 管、凍存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水紙 / 濾紙4. 計時器5. 去離子水 / 蒸餾水(用于洗滌液稀釋)6. 廢液缸、吸水紙 (五)可選 / 特殊實驗材料1. 封板膜 / 封板膠2. 振蕩器(微孔板搖床)3. 多道移液器(8/12 道)4. 加樣槽5. 微孔板封口膜、鋁箔(避光)四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存(2–8℃ 或 -20℃)2.避免陽光直射,酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色,異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用,剩余按要求保存五、結果計算(通用流程)1. 數據處理(1)扣除空白孔 / 本底孔吸光度(OD),得到校正 OD 值。(2)以標準品濃度為 X,校正 OD 為 Y,做標準曲線(常用四參數擬合 4PL)。 2.濃度計算(1)樣本 OD 代入標準曲線,得到理論濃度 C?。(2)若樣本經稀釋,*終濃度:C=C0×稀釋倍數2. 有效性判定(常見)(1)空白 OD 通常 ≤ 0.1;(2)標準曲線 R2 ≥ 0.98;(3)質控(QC)在可接受范圍;(4)樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。 六、示例(雙抗體夾心法)標準品濃度:0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD:0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD:0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后,某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍,則*終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
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